Développement de Lignées Cellulaires

Nos packs de développement de lignées cellulaires de cellules d'expression des mammifères ont été développés dans l'optique du schéma: découverte pré-clinique, procédé GMP et fabrication. Nous sommes expérimentés en développement de lignées cellulaires dans du CHO, NS0 et d'autres milieux cellulaires.

Additionnellement au génie de cellules pour l'expression à haut niveau de protéines sécrétées, nous pouvons concevoir des cellules pour visualiser les molécules de surface d'intérêt ou fournir des modèles de la maladie.

Dans toutes les étapes, de la conception à la post-livraison en passant par l'exécution du projet, Accuro Biologics assure un très haut niveau de retour de qualité à la clientèle et un support logistique permanent.

Les programmes de développement de lignées cellulaires impliquent les éléments-clés suivants:

• Compilation de systèmes de vecteurs d'expression désirés. Les vecteurs sont assemblés sur site par notre équipe de biologie moléculaire. Pour les projets d'expression d'anticorps, les vecteurs comportent des éléments génomiques (gènes d'immunoglobuline) et ne sont pas concernés par des questions liées à la propriété intellectuelle. L'assemblage de vecteurs est largement documenté avec analyse de la séquence en double chaîne pour toute cassette d'expression nouvellement assemblée. Dans le cas échéant, la validation fonctionnelle du vecteur est menée par analyse de transfection et de la protéine d'intérêt exprimée.
• Transfection stable des cellules d'hôtes. Dans la plupart des cas, l'électroporation est une méthode de choix. Elle peut être menée sans sérum si nécessaire pour certaines lignées pré-adaptées de receveurs. S'il y a lieu, d'autres procédures de transfert de gène peuvent être employées sur demande.
• Sélection de clones. Les clones avec la productivité la plus élevée sont individuellement isolés par sub-clonage à dilution limitée. Si appropriées, des procédures de criblage/sélection par FACS peuvent être développées ou appliquées.
• La cryopréservation des cellules est effectuée à chaque étape de la génération. Les procédures standard requièrent la séparation des cellules clonées des cellules souches pendant le développement et le stockage de clones. Nos procédures standard incluent la surveillance routinière des mycoplasmes.
• Détermination de la productivité. La productivité volumétrique (mg/litre) dans les conditions de culture statique ou avec agitateur, est déterminée en utilisant la méthode ELISA ou autres méthodes de vérification, directement sur le surnageant de culture pendant le développement de clones. Les molécules de surface exprimées peuvent être mesurées en utilisant la méthode FACS si appropriée.
• Productivité spécifique. Critique pour la comparabilité et la sélection de clones, la détermination de la productivité spécifique (pg/cellule/jour) est menée dans la fenêtre de temps optimale du cycle de culture. Cette détermination permet de donner un sens au temps de génération ou autre paramètre de base exigé pour le développement de procédé.
• Etudes de stabilité. Typiquement, on vérifie la stabilité de l'expression sur plus de 30 générations ou plus. S'il y a lieu, l'adaptation aux conditions de culture sans sérum peut être intégrée avec évaluation de la stabilité.

Production de Lignées Cellulaires

La synthèse de lignées cellulaires destinées aux réserves de la banque de cellules de production (MCB) et le développement complet des procédés de fabrication sont effectués suivant les directives ICH courantes et dans l'optique d'obtenir les homologations de normalisation et de fabrication.

De telles lignées cellulaires - les substrats de cellules - sont développées à partir de stocks entièrement documentés de receveurs, et sont cultivées en utilisant des milieux, des suppléments de milieux et des consommables tous certifiés. Les projets sont livrés avec l'historique entièrement documentée de développement des cellules, des certificats d'analyse et des packages de données.

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